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本试剂盒在利用液氮充分磨碎植物组织的同时，采用特殊的试剂对植物细胞释放出来的蛋白进行沉淀，并使用广谱蛋白酶抑制剂抑制蛋白酶活性，最大程度地保持所抽提蛋白质的完整性，而且最终的蛋白抽提物呈干粉状，有利于蛋白质的长期稳定保存。提取的蛋白，包括膜蛋白，核蛋白，胞质蛋白以及在植物组织中含有的稀有蛋白在内的全蛋白。分离得到的蛋白组分可应用于SDS-PAGE、Western blot等。每次可以提取100mg植物组织，本试剂盒可以使用50次。

• 提取的蛋白质是包括稀有蛋白在内植物细胞全蛋白质；
  
• 可以进行50×100mg植物组织蛋白提取；
  
• 经过适当处理后，可以用于2D电泳，等电点聚焦等实验；
  
• 对植物细胞的裂解效果和植物细胞的非蛋白质成分去除效果好；
  
• 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。

• 使用液氮时，请注意戴上防冻手套，避免液氮冻伤。若研磨的组织量较多，可多次加入液氮，保持植物组织处于充分冷冻状态时研磨。
  
• 植物细胞壁的破碎程度会影响蛋白的抽提效果，故在步骤3中尽量将植物组织充分研磨粉碎，以破碎细胞壁，促进细胞中蛋白的释放，同时尽量不要取植物的唯管组织。在步骤9中冷冻的固体样品中含有或多或少的植物纤维，在加入适当的样品缓冲液对冷冻干燥固体溶解离心后会产生植物纤维沉淀，不影响下游实验。
  
• 用含有SDS，尿素，SB3-10等的样品缓冲液对冷冻干燥的样品进行溶解，有助于疏水性蛋白质的完全溶解。
  
• 如果用于2D电泳，可以将蛋白质沉淀用乙醚：乙醇(1:1 V/V)混合液进行振荡洗涤，可以进一步减少沉淀中的盐和有机物残留，或用2D样品清洁试剂减少盐和有机物残留，一般情况下没有必要。
  
• 可以采用我司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(GS1485)或改良型Lowry法蛋白质浓度定量试剂盒(GS1487)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 对于SDS-PAGE电泳，可以使用我司生产的无毒型考马氏亮蓝染色液(GS1479)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)或通用型蛋白染色液(GS2027)进行染色。
  
• Solution A和Solution B易挥发，有一定的腐蚀性，刺激性气味和易燃性，实验时避免与皮肤接触且具有一定的，请戴上一次性手套及护目镜等防护用品在化学通风橱中进行，并注意远离明火。
  
• Solution C具有挥发性，有浓烈的刺激性气味，有毒及易燃性，实验时避免与皮肤接触且具有一定的，请戴上一次性手套及护目镜等防护用品在化学通风橱中进行，并注意远离明火。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请立即旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 实验前，将研钵和研槌置于-20℃冰箱中预冷；将植物组织置于-80℃冰箱中冷冻保存以备后用。
  
• 当植物组织仍处于冷冻状态时，用剪刀将植物组织剪碎。
  
• 将剪碎的植物组织置于预冷的研钵中，加入液氮保持植物组织处于冷冻状态，用研槌尽快地将植物组织研磨成粉末状。
  
  • 研磨必须充分，尽量磨成粉末。
• 取大约100mg的组织粉末，加入1mL Solution A和0.7μL Solution C，将粉末悬浮后，置于-20℃冰箱中，静置45min。
  4℃，15000rpm(20000g)，离心15min，取沉淀。
  
  • 样品中纤维素含量过多时可能影响最后蛋白的提取量。
• 往沉淀中加入1mL Solution B、10μL Solution D和0.7μL Solution C，并将沉淀重悬后，置于-20℃冰箱中，静置60min。
  4℃，15000rpm(20000g)，离心15min，取沉淀。
  
• 往沉淀中加入1mL Solution B、10μL Solution D和0.7μL Solution C，并将沉淀重悬后，立即置于4℃，15000rpm(20000g)，离心15min，取沉淀。
  
  • 当样品中纤维素含量过多时，可选择将样品先低离心去除纤维素，再高速离心获得蛋白沉淀。
• 取沉淀进行冷冻干燥，-80℃保存。
  
• 根据下游实验的要求，选择合适的样品缓冲液对冷冻干燥的样品进行溶解，4℃，15000rpm(20000g)，离心5min。
  
• 取上清，-20℃保存，取适量体积用于各种实验。